Постановка реакции непрямой иммунофлуоресценции при заболеваниях пчел

• Приготовленные из фильтрата личинок мазки фиксируют метанолом 5 мин. и высушивают.
• С помощью полосок пластилина шириной 3—4 мм поверхность 1—2 мазков делят на две части.

На одну часть мазка наносят в рабочем раз­ведении специфическую гипериммунную сыворотку кролика про­тив возбудителя американского гнильца — бациллы ларве, на вторую для контроля специфичности — нормальную кроличью сыворотку в разведении 1:50.

• Для исключения или подтверждения наличия в фильтрате возбудителей европейского гнильца или парагнильца поверх­ность двух мазков делят полосками пластилина на четыре части.

На каждую часть мазка в рабочем разведении раздельно нано­сят специфическую сыворотку против возбудителей этих гниль­цов: бациллы альвей, стрептококка апис, бациллы параальвей и нормальную сыворотку.

Препараты помещают во влажную камеру (бактериологическую чашку) на 30 мин. при 37 °С. Затем промывают сначала водопроводной водой, после этого забуференным физиологическим раствором с  рН 7,2—7,5 и высушивают.

• Затем наносят меченную флуоресцеином изотиоцианата (ФИТЦ) ослиную сыворотку против глобулинов кролика в рабочем разве­дении и помещают во влажную камеру на 30 мин. После этого препараты промывают 10 мин. в забуференном физрастворе.

Для устранения неспецифического свечения используют бычий альбумин, меченый родамином «Б», по общепринятой методике.

• Микро­скопию мазков проводят с помощью люминесцентного микроскопа под иммерсионной системой (объектив X 90, окуляр X 5). В качестве иммерсионного масла используют диметилфталат.

Постановка реакции считается положительной, если интенсивность свечения четыре или три креста и четко обозначенные формы спор и вегетативных клеток возбудителя американского гнильца, а при сме­шанной инфекции — и возбудителей европейского гнильца и парагнильца.