0
550

Исследования РДП (реакции диффузионной преципитации) при болезнях пчел


null
  • РДП ставят в агаровом геле в бактериологических чашках.
  • Для приготовления среды в колбу наливают 900 мл дистиллиро­ванной воды, добавляют 15 г агар-агара, 16 г хлористого натрия и 5 г хлористого кальция, кипятят до растворения агара, затем вносят 50 мл 0,5%-ного раствора фенола и 50 мл 0,03%-ного раствора метилоранжа.
  • После этого расплавленную среду 2—3 раза фильтруют через слой ваты до полной прозрачности.
  • Затем наливают в чашки по 25 мл и после остывания в агаре по трафа­рету из бумаги вырезают металлической трубкой круглые лунки диаметром 0,7 см на расстоянии 0,4 см одна от другой в виде шестиугольника с одной лункой в центре.  Донышки их заливают каплей расплавленной среды. В одной чашке размещают обычно 3-4 системы лунок.
  • В РДП используют приготовленный антиген из погибших личинок пчел и выделенной культуры возбудителя в неразведенном виде. Для встречной диффузии антиген нали­вают в периферийные лунки, а специфическую сыворотку в центральную или наоборот.
  • Чашки с агаром ставят в термостат при 37 °С и выдерживают 20—22 ч, затем 3-4 дня при комнатной температуре. При положительной реакции между лунками с антигеном и сывороткой появляются четкие линии преципита­ции в виде беловатых полосок. В контрольных системах лунок результаты отрицательные.
  • При необходимости определения патогенных свойств возбуди­теля в лабораторных условиях заражают расплод или кроликов.
  • Для биопробы с расплодом сначала готовят личиночный корм: перги — 50 г; пекарских дрожжей — 5 г; воды водопроводной — 100 мл.

Смесь помещают в колбу, смешивают, нагревают на водяной бане 45 мин. при температуре 100 °С и после охлаждения добавляют равный объем непрогретого меда. В стерильные бактериологические чашки, дно которых покрывают слоем ваты и двумя слоями стерильной марли, помещают по 10 мл теплого корма.

От здоровой пчелиной семьи из соты с открытым распло­дом при помощи тонкого шпателя, изготовленного из алюминия или гусиного пера, осторожно извлекают 15—20 трех, четырехдневных личинок и помещают в чашки с кормом, которые ставят в термостат при температуре 35 °С.

  • Через сутки отбирают здо­ровых личинок и переносят в заранее подготовленную теплую чашку. Их заражают путем скармливания свежего корма, в кото­рый добавляют 2 млрд выделенных микроорганизмов. Больных личинок отбирают ежедневно и исследуют микроскопическим и бактериологическим методами. Контролем являются незараженные личинки пчел, содержащиеся в аналогичных условиях.
Комментировать от
или
еще рекомендуем