0
80

Порядок исследования патматериала при заболеваниях пчел гнильцем

 

null

Каждый образец рас­плода исследуют по следующей схеме:

  • визуальный осмотр сотов с расплодом;
  • отбор больных и погибших личинок пчел и приготовление из них диагностического смыва;
  • приготовление и микро­скопия нативных мазков из разложившихся личинок и их корочек;
  • постановка реакции непрямой иммунофлуоресценции (РНИФ);
  • посевы смывов из личинок на питательные среды для выделения чистой культуры возбудителя и его идентификации по морфологическим и культурным свойствам;
  • постановка реакции микроаглютинации (РМА) на стекле;
  • в сомнительных случаях изучают биохимические, серологические, а при необходимости и патогенные свойства выделенной культуры бациллы ларве заражением пчелиного расплода и кроликов.

При визуальном осмотре сотов обращают внимание на состояние открытого и печатного расплода, наличие пестроты расплода, количество больных и погибших личинок пчел, их положение в ячейках и внешний вид. При американском гнильце крышечки ячеек над погибшими личинками и куколками бывают запавшие, потемневшие,  с отверстиями различной величины, погибшие личинки в ячейках тягучей консистенции, темно-коричневого или бурого цвета, с запахом разваренного столярного клея. Обнаруженные характерные клинические признаки поражения расплода записывают в журнал учета и предварительно определяют вид гнильца или смешанную инфекцию.

Для приготовления диагностического смыва в каждом образце соты подбирают 10—15 ячеек с больными и погибшими личин­ками и их корочками, наливают в них пипеткой теплый (35—40 °С) стерильный физиологический раствор. Через 20—30 мин. (если несвежие образцы сотов, то и через 1—2 ч.) после тщательного смешивания гнилостную массу личинок отсасывают из ячеек стерильной пипеткой и помещают в чистую пробирку с 5 мл стерильного физраствора и растирают до гомогенной суспензии. Из полученной суспензии личинок и их корочек каждого образца сота готовят 4—5 тонких нативных мазков на предметных стек­лах. Два мазка без фиксации окрашивают 2%-ным раствором нигрозина (для сохранения в раствор добавляют 0,4 % хлоро­форма), два—три мазка после подсушивания на воздухе фикси­руют спирт-эфиром или на пламени спиртовки, один из них окра­шивают 2%-ным раствором фенолового фуксина в течение 1,5—2 мин. и один—два — по Граму. После высушивания микро­скопию мазков проводят под масляной иммерсией.

При наличии возбудителя в мазках, окрашенных нигрозином, обнаруживают характерные споры бациллы ларве в виде неокрашенных овальных телец на темном фоне. При окраске фуксином и по Граму в мазках выявляют окрашенные по краям споры овальной формы и прямые грамположительные палочки бациллы ларве (размером  2—6X0,5—0,8 мкм) с закругленными концами, расположенные одиночно или в виде цепочки. В случаях смешанной инфекции в мазках из суспензии личинок могут быть возбу­дители европейского гнильца или парагнильца, что следует учитывать при дальнейших исследованиях. Полученные резуль­таты осмотра сотов с расплодом и обнаруженные в мазках из патматериала споры бациллы ларве (при исключении других гнильцовых болезней), позволяют в первый день исследований сделать предварительное заключение о заболевании расплода.

В дальнейшем поступают так. Половину диагностического смыва из личинок отливают во вторую чистую пробирку. Мате­риал в одной пробирке нагревают на водяной бане до 70 С и в горячем виде фильтруют через бумажный фильтр в стерильную центрифужную пробирку. Полученный фильтрат центрифуги­руют при 5—6 тыс. об/мин. в течение 15 мин. или отстаивают 30—40 мин. Из осадка на хорошо обезжиренных спирт-эфиром предметных стеклах готовят 3—4 мазка, нанося материал по всей поверхности стекла. Остаток суспензии личинок в пробирке раз­бавляют стерильным физраствором (3—4 мл) и прогревают на водяной бане до 96—98 °С, контролируя температуру термо­метром. Его используют для посева на питательные среды и вы­деления культуры американского гнильца, непрогретый материал во второй пробирке — для выделения культур возбудителей евро­пейского гнильца и парагнильца.

Комментировать от
или
еще рекомендуем